长臂生物素标记试剂盒:
长臂生物素标记试剂盒
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Cat |
试剂盒组分 |
规格 |
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SA821 |
REAGENTⅠ长臂生物素 |
1mg×5 |
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SA823 |
REAGENT Ⅱ 溶媒 |
1.5ml |
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SA814 |
REAGENT Ⅳ 2MNa2CO3 |
1.5ml |
贮存：-20℃保存，稳定期2年
操作方法：
1) 准备待标抗体、HRP等等:
将待标抗体配成1mg／m1溶液。
2)生物素的活化：
从-20℃取出REAGENT Ⅱ溶媒，37℃水浴5分钟至完全溶解，取100ul，加入到REAGENT Ⅰ生物素中，轻轻吹打至完全溶解。混匀室温放置15分钟。注：反应时间要充分，准确。
3)标记：
将活化的生物素全部转入1ml待标物中，加入REAGENT Ⅳ100ul, PH约在9.0-10.0，室温4h。
4) 透析：
4℃条件下使上述混合液体以PBS透析过夜，中间换液若干次（如有沉淀，离心除去后再透析）。
5) 保存：加等体积甘油，-20℃分装存放。
应用范围：
用于HRP、蛋白、核酸及核酸探针、抗体、抗原的标记，也适用含有氨基（NH4-）的小分子标记。
特点：
1.操作简便，标记率高，活性好。
2. 易于保存和运输，减少生物素的失活。
注意事项：
1）透析袋选择：
一定注意透析袋孔径的大小，防止蛋白过多渗出。一般透析袋孔径约为待标记蛋白分子量的1/10。如HRP 分子量是44KD，选择3k；抗体150KD，选择15K。
2）透析要充分，防止游离生物素，竞争反应。
3）本方法是针对待标记物的氨基进行标记。因此待标记物的缓冲液，如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris等等有氨基的缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，防止干扰标记。
4）标记时，如果PH偏酸、低于在9.0-10.0，再加入REAGENT Ⅳ100ul或适量。
长臂生物素标记试剂盒
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